医院病理科专用污水处理设备
常用的固定剂:
1)10%福尔马林缓冲液(pH7.4)2)4%多聚甲醛磷酸缓冲液(pH7.4) 3)Bouin液 4)Zamboni’s液 5)丙酮 6)95%乙醇 7)A-F液 7.何谓脱水,脱水的目的、常用脱水剂及脱水注意事项。
定义:利用某种化学试剂逐步将标本内部吸收的水分置换出来,以使标本处于无水状态,这一过程叫脱水。 目的和原则1有利于标本的下一步处理,即透明、浸透、包埋 2有利于切片的操作 3有利于标本的长久保存
常用的脱水剂:1.单纯脱水剂:如乙醇、丙酮和甲醇 2.脱水兼透明剂:如正丁醇、叔丁醇等
注意事项:脱水时必须由低浓度脱水剂开始,逐步转入高浓度脱水剂,经过各级浓度的脱水剂使其所含的水分逐渐减少而代之以脱水剂。防止组织过度收缩变形,或脱水不完全而影响制片效果。
8.石蜡包埋程序
1)组织取材3mm厚度,固定于福尔马林数小时后再换以新鲜福尔马林固定数小时。
2)组织流水冲洗6-12h。
3)70%酒精2-4h。
4)80%酒精2-4h。
5)90%酒精2-4h。
6)95%酒精(Ⅰ、Ⅱ)2-4h。
7)100%酒精(Ⅰ、Ⅱ )1-2h。
8)二甲苯(Ⅰ)5-30min。
9)(二甲苯(Ⅱ) 5-30min)。
10)浸蜡(Ⅰ、Ⅱ )2h。
11)组织包埋
9、石蜡切片与冰冻切片的优缺点?
石蜡切片优点1.标本大小灵活2.切片厚度均匀(1-200μm)3.可少量或批量制作4.切片保持时间长 缺点1.不能很好地保存细胞组织内酶或抗原的活性2.脂肪被溶解3.不能保障大且坚硬组织的切片质量
冰冻切片法优点• 切片制作时间短• 较好的保存脂肪和类脂、酶及抗原活性• 可应用于脂肪显示,酶的定位、定性甚至定量、组织荧光、免疫荧光和放射自显影等方面
缺点• 标本结构和形态的显示逊色于石蜡切片• 冷冻过程中易形成“冰晶”• 难以制作连续切片和薄的切片
10、染色的目的,普通染色、特殊染色、复染色定义。常用染色方法。
染色的目的:将标本切片浸于染色剂内,经一定的时间,使组织或细胞及其他的成分被染上不同的颜色,产生不同的折射率,便于在光镜下进行观察。
普通染色:最广泛应用的是苏木精和伊红染色,又称常规染色。 特殊染色:为显示特定的组织结构或其他的特殊成分。 复染色:衬托主染色所进行的染色。 常用的染色方法 一)苏木精(素):是现今最常用、最有价值的常规细胞核染色剂,习惯上称苏木精是碱性染料 二)伊红:是一种胞浆较理想的染色剂。常用伊红Y。酸性染料组织成分呈弥漫性染色。
11、石蜡切片常规染色步骤。
1) 脱蜡至水
①二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ各5-10min②100%乙醇 (5~10)min×2或3次③依次95%乙醇、90%乙醇、80%乙醇、70%乙醇各5~10min④蒸馏水浸洗 2~5min 2)苏木精染色:
① 苏木精1-10min。② 自来水流水冲洗。③ 0.5%盐酸-乙醇分色,数秒-数十秒。自来水快洗。
④ 0.5%氨水蓝化,30sec-1min,自来水冲洗⑤ 光镜下镜检细胞核分色程度。⑥ 自来水流水冲洗3min。
3)伊红染色
① 1%伊红1-10min。 ② 蒸馏水快洗。
5.脱水、透明和封固:
① 70%、80%、90%乙醇速洗,每级数秒-数十秒。② 95%30sec-1min.光镜下监控细胞核与细胞质颜色对比。 ③ 100%乙醇,3-5min,2次。④ 二甲苯Ⅰ、Ⅱ,各5-10min。⑤ 封片:中性树胶
12、组织化学定义及特征。
组织化学(histochemistry)或细胞化学(cytochemistry):是基于已知的化学反应,在组织或细胞原位上显示出组织或细胞中的化学物质,并研究其化学性质及功能关系的一门技术。是在形态学的基础上,研究组织或细胞中化学物质的形态、化学成分及定位、定量和代谢状态的学科。
组织化学的特征:应用物理的和化学的方法来查明细胞或组织的化学成分; 用组织学、化学、物理学原理,研究细胞或组织的结构、功能与化学的关系;
对细胞或组织成分的定位、定性、定量的特征进行研究,来认识细胞或组织结构与功能的关系。 具有较强的特异性。
13、组织化学技术的基本要求。
为了能在完好的结构上同时显示其化学物质,组织化学技术必须做到: (1)保存组织(细胞)在生活状态下的结构;
(2)保存组织(细胞)内的生前化学成分、酶活性及检测目的物;
(3)所使用的染色方法是按照已知的化学或物理反应原理进行。
(4)反应产物应在组织结构上形成稳定的有色沉淀物质。
(5)检测手段要有高度的敏感性、特异性和可重复性。
(6)生成物的反应产物必须在原位沉淀,保证定位的精确性及稳定性。
14、组织(细胞)化学基本步骤冰冻切片或石蜡切片等常规处理后,再进行组织(细胞)化学染色,在光镜下观察。
影响酶活性的因素:
1 、温度:大部分酶反应的合适温度为37℃。
2、 pH: 酶有适合酶反应速度的pH(大部分为7.0
3、抑制剂 能使酶活性降低的物质
4、激活剂 能使酶活性增高的化学物质
5 、底物浓度对酶反应速度的影响
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